Главная > Болезни > Задачи по определению групп крови в клинической лаборатории

Задачи по определению групп крови в клинической лаборатории

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стан­дартным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (І), А (II), В (III), АВ (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная ки­слота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаива­ния сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, ко­торые сразу же запаиваются или герметично закупориваются.

Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютини­рующим сывороткам:

1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течение 15-20 с. а через 2 мин. она должна быть четкой;

2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и пер­вой групп:

3. титр сыворотки должен быть не ниже 1 : 32;

4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязне­ния, прозрачной;

5. каждая ампула должка иметь паспорт с обозначением груп­пы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы.

Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изогемагг­лютинирующих сывороток: 0(1)- не окрашивается, А(II) — синий цвет, В(III) — розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично за­крытыми, в темном месте, лучше в холодильнике.

Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроци­тами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эрит­роцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворот­ки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При оп­ределении титра сыворотки, постоянной величиной являются стан­дартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоян­ной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относи­тельное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к ис­пытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть дру­гой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода оп­ределения. При определении капельным методом на тарелке у здоро­вых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше.

Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он по­вышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболева­ниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процессов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыво­ротки остается почти неизменным.

Зависимость реакции агглютинации от физико-химических условий

На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд фи­зических и химических факторов.

Температура. При низкой температуре происходит неспецифи­ческая «холодовая агглютинация». Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. «Холодовая агглю­тинация» обусловлена наличием в сыворотке особого холодового агг­лютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглю­тинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке.

Химические Факторы. Течение агглютинации зависит от степе­ни концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при со­держании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не насту­пает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавлении 10 % раствора лимоннокислого натрия.

Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодей­ствии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специ­фической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является фено­мен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при ком­натной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп, включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена — бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)1V.

Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязненном крови, Встречается она сравнительно редко и называет­ся панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглю­тинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сыво­роткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях гепатолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выяв­ляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре те­ла, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации.

Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловле­но склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ (ПРОСТОЙ МЕТОД)

В повседневной клинической практике наиболее часто применя­ется определение групп крови по стандартным изогемагглютинирую­щим сывороткам. Суть метода-с помощью стандартных изогемагглю­тинирующих сывороток определяется наличие в исследуемой крови групповых антигенов А и В.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), AB(1V) групп двух серий, изотонический раствор хлорида на­трия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пи­петки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Для определения группы крови используют блюдцеобраз­ные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозначе­ния соответственно стандартным сывороткам.

Определение группы крови производится при температуре не ниже +15° С и не выше +25° С.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Осмотреть стандартные гемагглютинируюшие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок год­ности, были правильно расположены по отношению друг к другу.

3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного.

4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандарт­ной сыворотки — первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом.

5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и проколоть стерильной иглой, при этом первую кап­лю крови удалить.

6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на тарелку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а за­тем уголком предметного стекла перенести в капли сыворот­ки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотно­шение исследуемой крови и стандартной сыворотки должно быть 1:10.

7. Место укола пальца обработать спиртом.

8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от­дельной палочкой.

9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто­янно обращая внимание на лунки, где может наступить агглютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агг­лютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия.

10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри­цательной.

Агглютинация наступает обычно в течение первых 10-30 се­кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (агг- лютинаты), которые состоят из эритроцитов.

Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать.

1. Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютина­ции эритроцитов во всех лунках — группа крови О (I) первая;

2. Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютиниро­вали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во второй — группа крови А (II) вторая;

3. Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей — группа В (III) третья;

4. Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты во всех лунках — данная кровь относится к четвертой группе AB(IV). Если исследуемая кровь оказалась AB(IV), группы проводится дополнительное контрольное исследование со стандарт­ной сывороткой AB(1V) группы. При отсутствии агглютинации иссле­дуемой крови с сывороткой AB(IV) группы данную кровь можно от­нести к четвертой группе.

Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про­вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ (ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ) (перекрестный способ)

Суть метода — с помощью стандартных изогемагглютинирую­щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро­цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител аир. Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро­цитов 0(1), А(II) и В(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра­нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Читайте также:  Как можно понизить СОЭ в крови

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(1), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек­лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре­зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато­ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки.

3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(1), А(II), В(III), двух серий.

4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(1), А(II), В(III).

5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе­мой крови, а в стандартные эритроциты — по две капли испытуемой сыворотки.

6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из­меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов.

7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за на­ступлением агглютинации.

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво­ротками и стандартными эритроцитами)

1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти­нация с ними не происходит.

2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет агг­лютинации в трех стандартных сыворотках двух серий — в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина а и β, а в испытуемых эритро­цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы В(III) и со стандартной сывороткой группы 0(1), В(III) — в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови — агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе А(II).

4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы А(II) и со стандартной сывороткой группы А(II), 0(1) — в исследуемых эрит­роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке — агглю­тинин а. Следовательно, кровь относится к группе В(III).

5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю­тинация со стандартными сыворотками — в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от­сутствуют оба агглютинина кровь относится к группе AB(IV).

Примечание. Результат перекрестного способа считается дос­товерным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинируюшими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

Определение группы крови можно произвести с помощью мо­ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны антн-А и антн-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома — это клеточный гибрид, возник­ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло­нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родите­лей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухо­левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им­мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе­ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге­магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100, 200 доз с растворителем, при­ложенным к каждой ампуле по 2, 5, 10, 20 мл соответственно. Лиофилизированный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анто-В.

Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото­нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови.

3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента.

4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А — красный, анти-В — синий).

5. Взять кровь реципиента и донора.

6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую — цоликлон анти-А, во вторую — цоликлон анти-В.

7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи­петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше ка­пли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна.

8. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин.

9. Оценить результат пробы без добавления изотонического раствора натрия хлорида.

При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонаи группа крови О(I) — первая.

При наличии агглютинации с цоликлоном анти-А группа крови А(II) — вторая.

При наличии агглютинации с цоликлоном анти-В группа крови В(III) — третья.

При наличии агглютинации с двумя цоликлонамн группа крови AB(IV) — четвертая.

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

Ошибки при определении групповой принадлежности крови мо­гут быть обусловлены тремя видами причин:

— неполноценностью стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;

— особенностями испытуемой крови.

— нарушение порядка расположения сывороток на планшете;

— нарушение соотношения сыворотки и эритроцитов; несоблюдение внешних условий (плохая освещенность, из­менение температуры окружающей среды) несоблюдение положенного для реакции агглютинации вре­мени применение загрязненных кровью планшетов, пипеток, предметных стекол;

— неправильная запись исследуемой крови;

Применение неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

слабые стандартные сыворотки с титром ниже 1:32 или ис­текшим сроком годности могут вызывать позднюю и слабую агглютинацию;

— применение негодных стандартных сывороток или эритроци­тов, нестерильно приготовленных и недостаточно законсер­вированных, ведет к возникновению неспецифической, «бак­териальной» агглютинации.

Особенности испытуемой крови

— наличие в крови слабого агглютиногена А2.

— кровь обладает свойством «панагглютинации» или «аутоагглютинацни», т. е. дает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже со своей собственной сывороткой. Для устранения панагглютинации планшет помещают в термостат при температуре 37° на 5 минут, после чего панагглютинация исчезает, а истинная остается.

ТАКТИКА ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППЫ КРОВИ

Непосредственно в отделении группа крови определяется вра­чом по стандартным изогемагглютннирующим сывороткам или с по­мощью цоликлонов, после этого в серологической лаборатории про­изводится проверка перекрестным методом. Если результаты совпа­дают, то группа крови считается определенной. В случае расхождения результатов, производятся повторные исследования.

В экстренных ситуациях можно ограничится реакцией с изоге­магглютинирующими сыворотками или цоликлонами, но при воз­можности следует использовать перекрестный метод.

По материалам xn--80ahc0abogjs.com

Тема. Определение групп крови системы АВО. Определение резус-принадлежности.

Работа 1. Определение групп крови. Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существуют два групповых агглютиногена – А и В и два агглютинина – ά и β. Разные сочетания данных антигенов и антител образуют четыре группы крови: Оάβ (I), Аβ (II), Вά (III), АВо (IV).

Для установления группы крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Использование стандартных сывороток. Для работы необходимы: стандартные сыворотки крови групп О (I), А (II) и В (III), двух различных серий для каждой группы; изотонический раствор натрия хлорида; белая пластина со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.

Ход работы. На левой стороне пластины напишите «О», в середине – «А», справа «В», на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяете группу крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластину нанесите по одной капле стандартной сыворотки групп О,А,В. Стандартные сыворотки берут двух различных серий для каждой группы, поэтому всего получится шесть капель, которые образуют два ряда. Рядом с каждой каплей сыворотки нанесите по капле крови. Затем перемешайте сухой стеклянной палочкой сыворотку и кровь. Причем для каждой пары (капля сыворотки и капля крови) необходимо использовать свою палочку. После перемешивания пластину необходимо покачать и оставить на 1-2 минуты в покое. В течение 3-5 минут наблюдайте за ходом реакции изогемагглютинации. После полного наступления агглютинации добавьте к смеси эритроцитов с сывороткой по капле изотонического раствора и перемешайте. Реакция изогемагглютинации может быть положительной или отрицательной. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы, но разных серий должны совпадать. При наличии агглютинации с сыворотками всех трех групп проведите дополнительное исследование с сывороткой группы АВ для исключения агглютинации, вызванной антиэритроцитарными аутоантителами. Результат должен быть отрицательный!

Результаты реакций с сыворотками трех групп О (I), А (II), В (III) могут давать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см.табл.1).

Интерпритация результатов определения группы крови системы АВО с использованием стандартных сывороток

По материалам refdb.ru

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

  1. первичное определение группы крови и резус фактора (цоликлоны Анти-А, Анти-B и Анти-D)
  2. вторичная диагностика группы крови и резус-фактора (стандартные сыворотки и перекрестный способ, определение фенотипа, т.е. антигенов C, c, E, e, C w , K, k)

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D по системе AB0 и системе Резус

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А , анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Читайте также:  Ушиб пальца на ноге: симптомы, первая помощь, лечение

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А ;

цоликлон анти-В ;

цоликлон анти-D ;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Нанести цоликлоны анти-А , анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh + )
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh — )

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки
  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин. При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными. Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

По материалам anest-rean.ru

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ

Тюменская Государственная Медицинская Академия

Методическое пособие

для студентов 4-5 курсов лечебного факультета

«Сборник задач по лабораторной диагностике, вскармливанию и физическому развитию детей»

Кафедра детских болезней лечебного факультета ТГМА

Методическое пособие для студентов 4-5 курсов лечебного факультета «Сборник задач по лабораторной диагностике, вскармливанию и физическому развитию детей» в качестве учебно-тренирующего материала на практических занятиях и при внеаудиторной работе.

Под редакцией зав. кафедрой, д.м.н. заслуж. врача РФ А.В. Волковой.

Авторский состав: доцент Морева Г.В., доцент Кожевникова Л.А., доцент Чернышева Т.В.

Рецензент: к.м.н. доцент кафедры педиатрии педиатрического факультета Захарова Г.Я.

Техническое исполнение: Елфимов Д.А.

Методическое пособие для студентов составлено в соответствии с учебной программой по пропедевтике детских болезней и содержанием практических занятий по детским болезням на 4-5 курсах лечебного факультета.

Сборник включает задачи по расшифровке основных лабораторных анализов, используемых в практической медицине врачами всех медицинских профилей. Пособие дополнено приложениями, содержащими нормативные параметры и протоколы правильных ответов по всем типам представленных задач.

Утверждено центральным координационно-методическим советом ТюмГМА, 2000г.

Типовые задачи по общим анализам крови.

Типовые задачи по общим анализам мочи.

Задачи: анализы мочи по Нечипоренко.

Исследование мочи по Зимницкому.

Биохимический анализ крови.

Типовые задачи: копрологическое исследование.

Типовые задачи: дуоденальное зондирование.

Типовые задачи по физическому развитию.

Типовые задачи по питанию.

Нормативные показатели состава периферической крови детей различного возраста.

Основные биохимические показатели сыворотки крови у детей.

Нормативы общего анализа мочи.

Нормативы количественной пробы мочи по Нечипоренко.

Копрограммы здоровых детей.

Этапы и нормы фракционного дуоденального зондирования.

Основные требования по питанию детей.

Пример формулировки ответа к задаче по вскармливанию детей 1-го года жизни.

Пример формулировки ответа задачи по физическому развитию.

Пример формулировки заключения по общему анализу крови.

Пример формулировки ответа по общему анализу мочи.

Пример формулировки ответа по пробе по Нечипоренко.

Пример формулировки ответа по пробе по Зимницкому.

Пример формулировки ответа по копрограмме.

Пример формулировки ответа по дуоденальному зондированию.

Типовые задачи по общим анализам крови

Задачи: анализы мочи по Нечипоренко

Исследование мочи по Зимницкому

Биохимический анализ крови

Дать оценку физического развития мальчика 6 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 17 кг, рост 105 см, окружность груди 53 см.

Дать оценку физического развития девочки 5 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 18 кг, рост 106 см, окружность груди 54 см.

Дать оценку физического развития мальчика 10 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 37 кг, рост 137 см, окружность груди 66 см.

Дать оценку физического развития девочки 9 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 30 кг, рост 136 см, окружность груди 65 см.

Дать оценку физического развития девочки 12 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 39 кг, рост 140 см, окружность груди 68 см.

Дать оценку физического развития девочки 8 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 31 кг, рост 134 см, окружность груди 64 см.

Дать оценку физического развития мальчика 2-х лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 15 кг, рост 93 см, окружность груди 55 см.

Дать оценку физического развития девочки 3 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 17 кг, рост 96 см, окружность груди 54 см.

Дать оценку физического развития девочки 6 месяцев, используя формулы центильные таблицы, если фактически ребенок весит 5200 г, рост 58 см, окружность груди 40 см. Масса при рождении 2800 г., рост 50 см.

Дать оценку физического развития мальчика 4 месяца, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 6000 г, рост 60 см, окружность груди 42 см. Масса ребенка при рождении 4000 г, рост 52 см.

Дать оценку физического развития девочки 13 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 63 кг, рост 160 см, окружность грудной клетки 82 см.

Оценить физическое развитие мальчика 14 лет, используя формулы и центильные таблицы, если фактически ребенок весит 40 кг, рост 147 см, окружность груди 66 см, окружность головы 56 см.

Типовые задачи по питанию

Новорожденный ребенок в возрасте 3 дней, масса при рождении 3050 г. Имеются противопоказания для естественного вскармливания. Назначить питание

Назначить ребенку в возрасте 5 месяцев питание по часам. Находится на искусственном вскармливании с 6 недель. Масса при рождении 3400 г.

Ребенок родился массой 3150 г. С рождения на искусственном вскармливании, сейчас ему 4 месяца. Назначить питание.

По материалам infopedia.su

Добавить комментарий